Corte y Confección de DNA

Resumen: 

Si te apasiona la genética...¡este es tu proyecto!

"Corte y confección de DNA" pretende introducir a los/as alumnos/as en la instrumentación y metodología de las técnicas de DNA recombinante utilizadas en Ingeniería Genética.

Los/as estudiantes participarán en actividades experimentales para la extracción, separación e identificación de ácidos nucleicos y, así, conocer las herramientas y las técnicas básicas informáticas y de laboratorio que se utilizan para su manipulación. Posteriormente, realizarán una clonación en bacterias a partir del DNA extraído, todo ello acompañado de introducciones teóricas sobre algunos de los aspectos más relevantes relacionados con la tecnología utilizada, así como con el impacto social y económico de la misma.

Los/as participantes tendrán acceso a la manipulación de pipetas automáticas, microcentrífugas, sistemas de PCR, de incubación... y a todos los medios necesarios para las actividades propuestas. 

 

¿Qué vamos a hacer? ¿Cómo vamos a trabajar en el laboratorio? 

1ª Sesión: 
  • Introducción: instrumentación utilizada en Ingeniería Genética para manipular ácidos nucleidos, fundamentos en los que están basados los protocolos de extracción y separación de los mismos por electroferesis en geles agarosa.
  • Extracción de ácidos nucleicos (RNA y DNA) de bacterias (DNA genómico, RNA, DNA plasmídico).
  • Tratamiento con enzimas (DNAasa y RNAasa) para la identificación del tipo de ácido nucleicos.
  • Separación de los ácidos nucleicos mediante electroforesis.
2ª Sesión: 
  • Visualización y discusión de resultados: se debatirá acerca de los resultados obtenidos en la identificación y separación de los ácidos nucleicos.
  • Introducción de la metodología para la clonación de genes: enzimas de restricción, ligasas, etc.
  • Extracción y digestiones restrictasas: miniprep con EcoRI y BamHI de las miniprep y de dos plásmidos.
  • Introducción a las técnicas de ligación y clonación: preparación de medio de cultivo líquido y sólido. Preparación de una ligación.
3ª Sesión: 
  • Introducción a los métodos de transformación en bacterias: los/as alumnos/as realizarán una transformación de E. coli con las ligaciones preparadas en la sesión anterior y con los controles apropiados.
  • Extracción y digestiones restrictasas: electroforesis y visualización en geles de agarosa.
  • Genotipado detección feniltiocarbamida: extracción de DNA de la mucosa y PCR para detectar alelos.
  • Transformación: inoculación de medios sólidos con la ligación.
4ª Sesión: 
  • Genotipado: visualización en geles de agarosas de los PCR.
  • Transformación: visualización de colonias. Discusión de los resultados de la transformación.
  • Fenotipado: discusión de los resultados de la ligación y del genotipado.
  • Visualización de los geles de agarosa (cracking) y discusión general.
5ª Sesión: 
  • Realización de una exposición oral que resuma los objetivos, los materiales, los métodos y los resultados de las actividades realizadas. 
  • Discusión general tras cada exposición.
Referencias recomendadas: 

BIBLIOGRAFÍA

  • Benito y Espino. “Genética: conceptos esenciales”. Editorial Médica Panamericana, 2012.
  • Pierce et al., “Fundamentos de genética: conceptos y relaciones”. Ed. Médica Panamericana, 2011.
  • Klug, Cummings y Spencer. “Conceptos de genética”. 8ª edición. Editorial Pearson Educación S.A. Madrid. 2006.
Lugar donde se desarrollará el proyecto: 
Universidad de Málaga
Facultad de Ciencias
Bulevar Louis Pasteur, 31.
29010 Málaga
Departamento: 
Facultad de Ciencias / Departamento de Biología Celular, Genética y Fisiología
Provincia: